大戰(zhàn)綠妖之后，蜘蛛俠帕克（托比?馬奎爾 Tobey Maguire 飾）忍痛拒絕了他唯一的摯愛瑪麗（克爾斯滕?鄧斯特 Kirsten Dunst 飾），因為蜘蛛俠的身份會為自己和親人帶來巨大危險，帕克決定獨立承擔起蜘蛛俠的責任。 　　帕克一直在忙于應付各種挑戰(zhàn)：學習超能力的靈活運用；在超級英雄與平凡大學生的雙重身份下隱藏自我、小心翼翼地生活等等。帕克對瑪麗越來越難以自拔，但是作為蜘蛛俠又不能對瑪麗展開心扉。 　　好友哈利因為誤會蜘蛛俠而一直處處與其為作對；唯一的親人嬸嬸也對蜘蛛俠的真實身份產(chǎn)生了懷疑。同時，新的挑戰(zhàn)又出現(xiàn)了：邪惡而強大的章魚博士。帕克在種種壓力下肩負起蜘蛛俠的使命。